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第41章 附录6 植物细胞、组织离析标本的制作

离析法是借药物的作用将组织浸软,并使胞间层溶解、细胞分裂的一种非切片法,经分离的材料既可用作临时装片观察,也可制成永久切片长期使用。下面介绍六种常用的离析法和临时压片做成永久制片的方法。

一、离析方法

(一)铬酸—硝酸离析法

铬酸—硝酸离析法[杰弗里法(Jeffrey method)]适用于木质化组织,如木材、纤维、草本植物坚实的茎等。

1.离析液配制

10%铬酸和10%硝酸等量混合即成。

2.离析步骤

(1)将材料切成如火柴一样粗细的小条,长约1~2 cm,浸在上述离析液中1~2天。若为草本植物,可不必加温;若为木本植物可加温至30℃~40℃。

(2)用圆头玻棒轻轻敲打,如不易分离可换新鲜离析液继续浸一段时间;若很易分离,则表明浸渍时间已够,可进行下一步工作。

(3)分离后材料在清水中洗净,保存在50%酒精中备用。

(4)如需做永久片,可在1%番红液中染2~6小时。

(5)在水中彻底冲洗后即可放在载玻片上,加一滴水,盖好盖片,在显微镜下观察。

(6)如检查结果满意,可用临时片改制永久片的方法做成永久片标本。

(二)醋酸—过氧化氢离析法

醋酸—过氧化氢离析法[富兰克林法(Franklin method)]适用于离析一般木质化材料。材料经水煮30~60分钟后切成火柴大小,投入离析液(醋酸和6%过氧化氢等量混合)中,放于60℃温箱中离析24~48小时。其余步骤同前法。

(三)酒精—盐酸离析法

此法可用于水解离析非常柔软的材料,如根尖、茎尖和幼叶等。材料在此离析液(95%酒精和浓盐酸等量混合)中在50℃左右恒温下离析24小时,如材料已成半透明状态,即表示离析已完全,可进行以后几步的操作。

(四)硝酸—氯酸钾离析法

硝酸—氯酸钾离析法[舒尔茨法(Schultz method)]是将木材或其他较硬的木质化材料经水煮后放在试管中(材料大小同第一种),加入浓硝酸(用市售浓硝酸加蒸馏水1份制成),浸没材料,然后投入一小撮氯酸钾,放置室温下,处理几天到半月左右,用玻璃棒轻捣材料,当已能散开时,就取出用流水冲洗。其余步骤同前法。此种离析过程中有氯气散出,如材料较多,则必须放在通风橱内,注意预防氯气中毒。

(五)铬酸离析法

用徒手切片法切取新鲜幼嫩的材料,直接投入10%铬酸溶液中浸24~48小时。然后不冲洗就用甘油封固,并轻轻压挤盖玻片,可使细胞分离。此法不能用于木质化程度较高的材料。

(六)氨水离析法

此法适用于观察分生组织细胞的立体形状。

将刚发芽的蚕豆或其他材料的胚根,切成薄的纵切片,在浓氨水中浸24小时,以溶解去中层。再在10%氢氧化钠的50%酒精溶液中浸24小时,以溶去细胞壁以内的物质。然后用水洗净染色。染色方法是:将1%碘液滴在材料上,然后再加一滴66.5%硫酸(7份浓硫酸+3份蒸馏水)。取少许放于载玻片上,盖上盖玻片,用解剖针轻敲,使细胞分离。此刻在显微镜下便可看到分生组织细胞的立体形状。

二、永久制片法

将暂时的压片做成永久制片,一般以叔丁醇法最为简单可靠,步骤如下:

(1)将染色压挤后好的制片,直接倒放在盛有1/2 45%醋酸+1/2 95%酒精的培养皿中,使制片稍成倾斜。待过5~10分钟后,即可见盖玻片从载玻片上脱离,此时即按原来位置翻开。

(2)将已分开的载玻片与盖玻片,在吸水纸上吸去边上多余的醋酸液,换入1/2 95%酒精+1/2叔丁醇的培养皿中3分钟。

(3)再换入纯叔丁醇中3分钟。

(4)用油派胶或加拿大树胶封固。

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