实验目的
（1）了解志贺氏菌属系统检验原理。
（2）理解志贺氏菌属生化反应原理。
（3）掌握志贺氏菌属系统检验方法。
实验原理
志贺氏菌属的细菌，又称为痢疾杆菌。能引起痢疾症状的病原微生物很多，如志贺氏菌属、沙门氏菌属、变形杆菌属、埃希氏菌属等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫及病毒等，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见。人类对志贺氏菌的易感性较高，所以在食物和饮用水的卫生检验时，常以是否含有志贺氏菌作为指标。
与肠杆菌科各属细菌相比较，志贺氏菌属的主要鉴别特征为不运动，对各种糖的利用能力较差，并且在含糖的培养基内一般不形成可见气体。除运动力与生化反应外，志贺氏菌的进一步分群分型有赖于血清学试验。
实验材料
（一）菌种
某种志贺氏菌（Shigella sp。）、大肠杆菌（E。coli）。
（二）检样
食品检样。
（三）培养基及试剂
GN增菌液（培养基80）、HE琼脂（培养基81）、SS琼脂（培养基97）、伊红美蓝琼脂（EMB）（培养基71）、麦康凯琼脂（培养基88）、三糖铁琼脂（TSI）（培养基96）、半固体肉膏蛋白胨试管（培养基4）、赖氨酸脱羧酶试验培养基（培养基32）、苯丙氨酸培养基（培养基33）、西蒙氏柠檬酸琼脂（培养基52）、葡萄糖铵琼脂（培养基92）、葡萄糖半固体（培养基91）、缓冲葡萄糖蛋白胨水（培养基46）、糖发酵管（棉子糖，甘露糖，甘油，七叶苷及水杨苷）（培养基98）、5%乳糖发酵管（培养基94）、蛋白胨水（培养基35）、尿素琼脂（培养基42）。
氰化钾（KCN）、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂、氧化酶试剂及志贺氏菌属诊断血清（见附录III）。
（四）仪器及其他用品
天平（称取检样用）、均质器和乳钵、温箱、显微镜、灭菌广口瓶、灭菌三角瓶、灭菌平皿、载玻片、酒精灯、灭菌金属匙或玻璃棒、接种棒、镍铬丝、试管架、试管篓、硝酸纤维素滤膜。
实验流程
志贺氏菌属检验流程。
实验步骤
（一）增菌
称取检样25g，加入装有225mL GN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以800～10000r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36℃培养6～8h，培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应终止培养。
（二）分离
取增菌液1环，划线接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个；另取1环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板1个，于36℃培养18～24h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落。
（三）生物化学试验
挑取平板上的可疑菌落，接种在三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落以防遗漏。志贺氏菌属在三糖铁琼脂内的反应结果为底层产酸，不产气（福氏志贺氏菌6型可微产气），斜面产碱，不产生硫化氢；葡萄糖半固体管内沿穿刺线生长，无动力，具有以上特性的菌株，疑为志贺氏菌，可做血清学凝集试验。在做血清学试验的同时，应做苯丙氨酸脱氨酶、赖氨酸脱羧酶、西蒙氏柠檬酸盐和葡萄糖铵、尿素、KCN、水杨苷、七叶苷试验，志贺氏菌属均为阴性反应。必要时做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。并用生化试验方法做4个生化群的鉴定。
（四）血清学分型
挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用4种志贺氏菌多价血清检查。如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查；如果呈现凝集，则用A1，A2，B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，则用群和型因子血清分别检查。福氏志贺氏菌各型和亚型的型和群抗原。可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。
实验结果与报告
根据实验过程详细记录样品和对照菌种的各项结果，并作出结论报告。
思考题
（1）如何检出食品中的志贺氏菌？
（2）根据培养和生化试验，有否检出志贺氏菌？
（3）根据生化特性和血清学试验，检出的志贺氏菌属哪个群？哪个型？
